LABORATORIO DE ANALISIS CLINICOS
Recuento de Leucocitos
Objetivo: Realizar y
aplicar la metodología para determinar el número de leucocitos por mm3
Fundamento: Los
leucocitos son células sanguíneas que en base a su morfología se clasifican en:
Polimorfos nucleares o granulocitos y los mononucleares.
Se
incluyen como polimorfonucleares a: Los Basófilos, Neutrófilos y Eosinófilos.
En el gripo de los Mononucleares a: Los Linfocitos y Monocitos.
Los
leucocitos dentro del organismo participan desarrollando diferentes funciones
como son: La Fagocitosis, la defensa inmunológica específica o inespecífica.
El recuento leucocitario representa el número
de leucocitos en un litro de sangre completa. La fórmula leucocitaria tiene por
objetivo determinar los porcentajes de las distintas clases de leucocitos
normales y anormales en la sangre. A partir de los porcentajes puede incluso
calcularse el número real de cada clase de leucocitos por mm3 de sangre (valor
absoluto), conociéndose el total de leucocitos.
Principio: La cuantificación o recuento de leucocitos es
importante para el diagnóstico de algunas enfermedades, como por ejemplo: Las
leucemias.
El diluyente que más se utiliza en el laboratorio de
hematología es el de Turk, el cual contiene ácido acético en una concentración
hipertónica, lo cual provoca la lisis de los eritrocitos, pero, no de los
leucocitos, el diluyente contiene además unas gotas de violeta de genciana o
azul de metileno, el cual permite reconocer fácilmente a los leucocitos, ya que
tiñen ligeramente su núcleo, permitiendo observarlos más fácilmente.
La sangre
anticoagulada se deposita en un líquido que permite evidenciar los leucocitos,
manteniéndolos visibles, mientras que los eritrocitos son hemolizados. El
recuento del número de leucocitos o glóbulos blancos se expresa por mm3
(milímetro cúbico).
Equipos
-Microscopio.
-Hemocitómetro (Cámara de Neubauer).
Consta de los siguientes elementos:
Una lámina portaobjeto gruesa, en el centro se hallan dos
superficies cuadriculadas iguales separadas del resto de la lámina por surcos y
dos barras transversales algo más elevadas.
Una laminilla cubreobjetos ópticamente plana, que, al colocarse sobre las
barras elevadas de la lámina forma una cámara entre el cubreobjetos y la
superficie cuadriculada. La altura entre el cubreobjetos y la lámina
portaobjetos es de 0,1 mm.
Cada cuadrícula mide 3 mm de lado y se divide en 9 cuadrados grandes. Cada
uno de los cuales mide 1 mm2 de superficie, que se subdivide a su vez en 16
cuadrados medianos. El cuadrado grande central se divide en 25 cuadrados pequeños y cada uno de ellos en
16 cuadraditos. Cada cuadrado pequeño mide 0,2 mm de lado (0,04 mm2 de
superficie), y cada cuadradito mide 0,05 mm de lado (0,0025 mm2 de
superficie).
Cuadricula
Cámara de Neubauer
Materiales y reactivos requeridos
Pipeta de glóbulos blancos (De Thoma) o pipeta automática
(de 0 a 100 mL). Presenta cerca del extremo superior una marca de 11,
inmediatamente continúa una dilatación (bulbo) que contiene una perla que
funciona como mezcladora, luego sigue el extremo más largo de la pipeta (tallo)
que está dividida en 10 partes, con 2
marcas: 1 (parte final del bulbo) y 0,5 (a la mitad del tallo). Se le acopla a
su extremo superior 1 tubo de goma y una bombilla para aspirar.
1.
Diluyente de glóbulos
blancos: Solución de Turk al 1%.
2.
Contador manual (Sólo si
fuera necesario).
3.
Papel filtro.
4.
Alcohol al 70%.
5.
Algodón.
6.
Jeringa y agujas
(21 o 22) o base, aguja y tubo de vacutainer
Técnica.
1.-Una vez obtenida la sangre con anticoagulante o sangre capilar del dedo,
se procede a aspirar la sangre con la pipeta de glóbulos blancos hasta la marca
de 0,5 y limpiar la punta con papel
absorbente.
2.-Introducir la pipeta en el tubo que contenga solución de Turk y absorber
hasta la marca de 11 (no debe haber burbujas).
3.-Tapar ambos extremos y proceder a mezclar manualmente o en un rotador
automático por 2 ó 3 minutos.
4.-Monte la laminilla de vidrio en
la cámara para recuento que debe estar limpia y seca.
5.-Agitar la pipeta y descartar las
cuatro primeras gotas para luego colocar una gota pequeña de esta solución en
la cámara.
6.-Deje reposar por espacio de 3 minutos
para que las células se sedimenten.
7.-Enfocar con objetivo de 10x y
contar en 4 cuadrados grandes angulares. Cuando se usa la pipeta automática, se
toma 20 mL (0,02 mL) de sangre total con anticoagulante o sangre capilar con
anticoagulante y se diluye en un tubo que contenga 380 mL de solución de Turk
(aquí tenemos una dilución 1:20).
Lectura
La lectura se realiza en los campos 1, 3, 7 y 9 como está indicado en la
figura. Además de los leucocitos contados dentro de cada uno de los cuadrantes,
se deben contar todos los leucocitos que se encuentren adheridos en la línea
horizontal superior y vertical exterior, o de lo contrario, todos los
leucocitos, adheridos a la línea horizontal inferior y vertical interior.
Resultados
Leucocitos contados en 4 campos
Nº de leucocitos x mm³ = altura x dilución x área
Leucocitos contados en 4 campos Reemplazando = 1/10 x
1/20 x 4
Leucocitos contados en 4 campos = 4/200 = 1/50
Nº de leucocitos x mm³ = Nº leucocitos contados x 50
4/200
Resultados:
Conclusión:
Las células o
glóbulos blancos de la sangre son de dos tipos principales: los granulosos, con
núcleo multilobulado, y los no granulosos, que tienen un núcleo redondeado. Los
leucocitos granulosos o granulocitos incluyen los neutrófilos, que fagocitan y
destruyen bacterias; los eosinófilos, que aumentan su número y se activan en
presencia de ciertas infecciones y alergias, y los basófilos, que segregan
sustancias como la heparina, de propiedades anticoagulantes, y la histamina que
estimula el proceso de la inflamación. Los leucocitos no granulosos están
formados por linfocitos y un número más reducido de monocitos, asociados con el
sistema inmunológico. Los linfocitos desempeñan un papel importante en la
producción de anticuerpos y en la inmunidad celular. Los monocitos digieren
sustancias extrañas no bacterianas, por lo general durante el transcurso de
infecciones crónicas. Para poder realizar la práctica se hace el procedimiento
de cuenta directo pero se darán algunos aparte:
Para una cuenta
directa total o conteo en cámara de newbauer La cuenta total de
los leucocitos generalmente se mide en el hemocitometro después de diluir la sangre total 1 a 20 con un liquido
especial, el cual separa los eritrocitos. Pueden emplearse contadores
electrónicos. El rango normal en adultos es de 4-10x10^9/lt. En los niños la
cuenta es mayor: de 10-25x10^9/lt.., al nacer; desciende a 5-12.5x10^9/lt, a la
edad de 10 años y sigue el decenso anterior al nivel del adulto alrededor de
los 20 años de edad. Las cuantas visuales son relativamente inexactas, hasta
con 20% de error, pero los contadores electrónicos por lo general son mas
precisos dentro de 1 a 2%.
Cuenta diferencial
Se lleva acabo clasificando cuando menos 100 leucocitos sobre los frotis
de sangre. Luego se multiplica la cuenta total por la proporción presente para
dar el método absoluto. El rango numérico normal para los diferentes tipos de
leucocitos en el adulto es; neutrofilos, 2.5-7.5x10^9/lt; linfocitos,
1.5-3.5x10^9/lt.: monocitos, 0.2-0.8x10^9/lt.: eosinofilos, 0.04-0.4x10^9/lt.;
basófilos, 0.015-0.1x10^9/lt. En los niños hay relativamente más linfocitos,
los cuales a menudo sobrepasan a los neutrofilos. En los africanos, los
neutrofilos a menudo se encuentran en menor número que en cualquier europeo.
Cuanta directa de eosinófilos
En ocaciones tal procedimiento se lleva a cabo contando células en un
hemocitómetro después de dilución de la sangre con un líquido diluyente
especial.
Bibliografía:
·
"Sangre." Microsoft® Encarta® 2007 [DVD]. Microsoft
Corporation, 2006 eldia17 de marzo de 2012
·
Hematología clínica H.J.
Woodliff/R.P. Hermann de la biblioteca del cbtis199 el 18
de marzo de 2012.
·
Ciencias de la salud Sexta edición
Bertha Higashida Hirose
LABORATORIO DE ANALISIS CLINICOS
Cuenta de Plaquetas en Cámara de Neubauer
Propósito:
Que el alumno realice e interprete la
técnica directa para la cuenta de trombocitos o plaquetas en la Cámara de
Neubauer.
Fundamento:
Una
de las funciones der las plaquetas es participar en el mecanismos de la
hemostasia (Hemos= sangre, stasis=
Detención), adhiriéndose entre ellas y las paredes de los vasos lesionados,
para formar así, el trombo plaquetario o tapón hemostático.
El
paciente con un trastorno hemorrágico, clínicamente significativo, acude al
médico con algunos tipos de síntomas hemorrágicos, el tipo de hemorragia puede
indicar la parte defectuosa del mecanismo de coagulación, dentro de éstas
causas puede ser la falta en la cantidad adecuada de plaquetas (trombocitopenia).
La
hemorragia de vasos sanguíneos subcutáneos en piel intacta se pueden ver como
petequias o equimosis, las petequias son manchas de color rojo a morado menores
de 3 mm de diámetro. Resultan de la salida de sangre de vasos de tipo capilar.
Las equimosis son los “moretones” (NO CONFUNDIR
CON HEMATOMAS POR FAVOR), de mayor tamaño de diámetro y también tienen como
causa la salida de sangre de un vaso sanguíneo de mayor tamaño que un capilar,
son de color rojo a morado después se vuelven amarillentos, tardan en sanar de
2 a 4 semanas.
La equimosis puede presentarse espontáneamente o
debido a un traumatismo y puede ser dolorosa. Cuando se encuentran equimosis en
gran cantidad y sin traumatismo aparente, el trastorno se conoce como Diátesis
hemorrágica y puede ser producida por anormalidades en los vasos sanguíneos,
por la disminución en el número de plaquetas o bien por el mal funcionamiento
de las mismas.
Se
encuentra cifras de plaquetas por debajo de lo normal en padecimientos como:
Púrpuras
trombocitopénicas, en enfermedades como las leucemias que se asocian a
disminución en la producción de plaquetas, Síndrome de Wiscott-Aldrich,
enfermedad de Bernar-Soulier y en la anomalía de May-Hegglin.
También
pueden encontrarse cifras por debajo de lo normal en: El Alcoholismo, la
Esplenomegalia, etc.
Se
pueden encontrar cifras por arriba de lo normal (trombocitosis) en: La Leucemia
granulocítica crónica, Policitemia vera, Mielofibrosis, Hemorragia aguda,
Anemia por deficiencia de hierro, Anemia Hemolítica, etc.
Reactivos y Material:
Pipeta
de Thoma para glóbulos rojos.
Cámara
de Neubauer con cubrehematímetro (Hemocitómetro).
Agitador
para Pipeta de Thoma.
Cajas
de Petri.
Microscopio.
Papel
filtro
Muestra biológica:
Sangre venosa con EDTA.
Técnica:
1.-
Obtener 10 ml de sangre venosa, extraída por el procedimiento habitual,
utilizando como anticoagulante EDTA.
2.-
Se agita la sangre colocada en un tubo de ensaye y se procede a la cuenta de
plaquetas de la siguiente manera:
3.-
Llevar la sangre hasta la marca 1.0 de una pipeta de Thoma para glóbulos rojos,
aforando con la solución diluyente de plaquetas hasta la marca de 101 (Dilución
1: 100).
4.- Colocar la pipeta en el agitador y mezclar
durante 1 minuto.
5.-
Colocar la Cámara de Neubauer sobre una superficie horizontal y poner el
cubrehematímetro sobre las mesetas.
6.-
Descartar las primeras 4 gotas de la
´pipeta de Thoma. Con la quinta gota cargar la Cámara, depositándola entre la
meseta y el cubrehematímetro y dejarla difundir por capilaridad, teniendo
cuidado de que no se formen burbujas o se derrame el líquido hacia los surcos.
7.- Colocar la Cámara ya montada en el interior
de una caja de Petri, con papel filtro y absorbente humedecido en agua para
evitar la evaporación, dejar en reposo de 10 a 15 minutos.
8.-
Observar al microscopio contando en la cuadrícula central (para glóbulos rojos)
las plaquetas que aparecen mucho más pequeñas que los hematíes, redondas,
alargadas u ovales, altamente refringentes.
9.-
Realiza los cálculos siguientes para obtener la cantidad de plaquetas por mm3.
10.-
El cuadro central de la cuadricula mide 1.0 mm por lado y está dividido en 16
cuadritos más pequeños, de tal manera que el número total de éstos últimos es
de 400, mismos en los que se lleva a cabo el recuento de plaquetas.
Cálculos:
No.de
plaquetas / mm3 = No. de Plaquetas contadas X
Dilución X 10
Dilución:
1:100 =
100
Este
factor corresponde, para obtener los resultados por mm3 ya que el
volumen de la Cámara es de 0.1 mm3.
Ejemplo:
No.
de plaquetas = 375 X 100 X 10 = 375
000 plaquetas / mm3.
Informe:
1.-
Dibuja las plaquetas tal y como las observaste en la Cámara de Neubauer.
2.-
Esquematiza el proceso de la técnica que se siguió para la determinación
cuantitativa de las plaquetas.
3.-
Anota los cálculos necesarios que se realizaron para obtener el número de
plaquetas por mm3.
4.-
Investiga la composición del diluyente que se emplea para la cuenta de
plaquetas.
Conclusiones:
Las plaquetas de la sangre son cuerpos
pequeños, ovoideos, sin núcleo, con un diámetro mucho menor que el de los
eritrocitos. Los trombocitos o plaquetas se adhieren a la superficie interna de
la pared de los vasos sanguíneos en el lugar de la lesión y ocluyen el defecto
de la pared vascular. Conforme se destruyen, liberan agentes coagulantes que
conducen a la formación local de trombina que ayuda a formar un coágulo, el
primer paso en la cicatrización de una herida. Plaqueta,
también denominada trombocito, fragmento citoplasmático de un megacariocito (la
célula de mayor tamaño presente en la médula ósea), que se encuentra en la
sangre periférica, donde interviene en el proceso de coagulación de la sangre.
Son extruidas por la medula ósea o por el bazo. Normalmente hay de 150 000 a
450 000/pl de sangre.
Por lo general se cuentan directamente en un
hemocitómetro después de diluir la sangre 1 a 100. Se utiliza una gama de líquidos especiales, algunos de los
cuales separan los eritrocitos. Se requiere experiencia para obtener resultados
confiables; los valores varían algo según el método, pero puede aceptarse como
normal la cifra 150-400x 10^9/lt. Se puede hacer cuentas indirectas contando el
numerado de plaquetas en cada uno de los diez campos microscópicos, conteniendo
cada uno alrededor de 100 eritrocitos. Esto proporciona el número de plaquetas X10^9. Este método es relativamente
poco preciso, pero de cierto valor en la práctica.
Bibliografía
·
Hematología
Clínica de H.J. Woodliff y R.P. Herrmann EL DIA DE CONSULTA FUE EL 24 DE MARZO
D 2012
·
Sangre." Microsoft® Encarta® 2007 [DVD]. Microsoft
Corporation, 2006.Consulte esta fuente el día 16 de marzo de 2012.
·
Ciencias de la salud Sexta edición
Bertha Higashida hirose el dia 16 de marzo de 2012.
