jueves, 29 de marzo de 2012



S.E.M.S                                               DGETI



CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de Servicios No. 199

PRACTICA No. 1






ALUMNO: VÍCTOR MANUEL MERA ÁLVAREZ



“PROCESAR CULTIVOS BACTEREOLOGICOS”



4º DM LAB CLÍNICO





DR. VICENTE MARTÍNEZ FRAGOSO
Objetivo:

Realizar  técnicas de preparación de frotis, de fijación y de coloración, obtenidos de medios sólidos y líquidos. Identificar las principales formas bacterianas y la importancia de tinciones simples en la caracterización morfológica de estos microrganismos.


Fundamento:

Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología y bacteriana y las posibles agrupaciones de células que pudiera haber.

Las bacterias se caracterizan por ser microorganismos unicelulares que carecen de membrana nuclear, en las cuales el material nuclear está organizado en una tira continua, a veces circular, contenido en el citoplasma, presentan un actividad metabólica y se dividen por fisión binaria, son organismos sofisticados y altamente adaptables a cambios del medio ambiente. Debido a su ubicuidad y su alta capacidad de adaptación su importancia en el campo medico como agentes causales de daño es altamente notable.

En tamaño y forma las bacterias de importancia médica son microorganismos muy pequeños que se presentan en tres formas generales: esféricos designados como cocos, organismos en forma de bastón designados como bacilos, y de formas espirilas, dentro de estas tres mencionadas anteriormente se encuentran otros microorganismos que adoptan variantes morfológicas designadas como formas pleomórficas.

Debido al pequeño tamaño de la mayoría de los microorganismos, se requiere de un microscopio óptico, ya sea de campo claro, en el que la observación de células vivas es limitada debido a que las células son incoloras y permiten el paso de una gran cantidad de luz. La observación de frotis teñidos es más recomendable. El frotis se prepara haciendo una extensión de los microorganismos sobre una superficie transparente, en la cual se fijan y se tiñen los microorganismos. Deacuerdo al número de soluciones colorantes y a los objetivos de estudio se pueden realizar diferentes tipos de tinciones como lo son: simple, diferencial, negativa y selectiva. Los colorantes más utilizados son sales formadas por iones coloridos cargados conocidos como cromóforos. Por ejemplo:

Cloruro de azul de metileno à azul de metileno + Cl (cromóforo)

Si el cromóforo es un ion positivo el colorante es de tipo básico, pero si la carga es negativa será de tipo ácido. La mayoría de las bacterias son teñidas por colorantes básicos, que permean la pared celular y se adhieren por enlaces iónicos débiles a moléculas con cargas negativas de la célula bacterianas.

Material:
ü  5 portaobjetos

ü  Piseta

ü  Cuba

ü  Microscopio

ü  Asa de platino


Reactivos:
ü  Azul de metileno
ü  Yodo lugol
ü  Fenol
ü  Aceite de inmersión
ü  Agua destilada


Cultivos solidos

ü  Exudado vaginal

ü  Uroanálisis

ü  Faríngeo

Muestras biológicas:

ü  Heces

ü  Orina

Preparación de frotis:

1.      Lavar perfectamente portaobjetos, secarlos con papel y rotularlos dependiendo de la muestra que se colocara.

2.      Centrifugar la orina y decantar para obtener sedimento.
d

3.      Esterilizar el asa al fuego del mechero.
.      Dejar enfriar el asa para evitar que al tomar la muestra las bacterias contenidas en esta sean destruidas.   Colocar el sedimento en un porta objetos con una gota de agua destilada y diluir lentamente, para después  colocarle un cubreobjetos.
      
      Para los cultivos sólidos,  colocar una gota de agua destilada en la que se mezcla una pequeña muestra del cultivo (colonia), extenderla suavemente y dejar secar al aire.
En el caso de las  heces, colocar una gota de agua destilada en el centro del portaobjetos y con ayuda del asa de platino colocar una pequeña muestra de heces por lo regular donde exista sangre o moco, esta diluirla y colocarle una gota de yodo lugol al final colocarle un cubreobjetos.







Fijación de frotis:

1.      Los cultivos de los medios sólidos completamente secos se fijaran con calor. Para esto se pasara el frotis rápidamente  de 2 a 3 veces en el interior de la parte amarilla de la flama del mechero.
2.      Palpar la parte inferior del portaobjetos con el dorso de la mano izquierda para enfriar y comprobar que no hubo sobrecalentamiento.
Tinción simple:

1.      Cubrir el frotis con 2 gotas de azul de metileno durante 30 segundos a 1 minuto.
.      Eliminar el exceso de colorante con lavado suave al agua corriente o con la ayuda de una piseta con agua.

3.      Dejar secar al aire.
Resultados:
Quiste de Entamoeba
40X


Cristales en orina.
100x



Cristales en forma más abundante.
40x
Conclusión:
Realizar un frotis, pudiera parecer muy sencillo, pero lo más importante radica en saber interpretar sus resultados, ya que de ellos dependen los diagnósticos médicos, y por tanto la salud del paciente, por ello es necesario practicar mas y mas, para dominar su preparación, su manejo y con todo ello esta práctica que es tan sencilla pueda dar buenos resultados en ámbitos laborales.
Además nos enseña a seguir manejando distintas muestras biológicas, es decir que va tomado de la mano con prácticas anteriores, conjuntando conocimientos que más tarde nos servirán de mucho, siendo así nuestra preparación un tanto más completa.



Fuentes de consulta:

DOCUMENTOS:
·            Preparación de un frotis bacteriano, CONSULTADO EN:www.joseacortes.com › prácticas de laboratorio

No hay comentarios:

Publicar un comentario