Practica No. 3
LABORATORIO DE ANALISIS CLINICOS
Cuenta de Eritrocitos
Objetivo
La
finalidad de realizar una Biometría Hemática es la establecer un Diagnostico
presuntivo que sirva de ayuda al médico tratante para localizar la causa
probable en alguna enfermedad de tipo hematológico.
Fundamento
Los
principios generales de este recuento se basan en 2 puntos básicos, los cuales
consisten: Primero escoger un líquido de dilución, que no solamente diluya los
eritrocitos hasta cifras legibles, sino que también permita identificarlos y que destruya otros elementos celulares que
en ese momento no nos interesen y Segundo utilizar equipos automatizados que
nos proporcionen las lecturas del numero de eritrocitos por mm3.
Los
diluyentes más utilizados en el recuento de eritrocitos son el Líquido de
Hayem, las Soluciones de Gower, de Dacie o bien simplemente solución salina de
cloruro de sodio al 0.9%
Formula Roja
Objetivo
Realizar
un recuento de Eritrocitos por milímetro cúbico de sangre y que el alumno se
adiestre en el manejo de la pipeta de Thoma y de la cámara de Neubauer.
La sangre se diluye en un líquido que nos permite
observar claramente los hematíes, luego esta dilución se coloca en una cámara
de Neubauer con la ayuda de una pipeta automática o pipeta Pasteur y se cuentan
en el microscopio a un objetivo de 40x para calcular el número de glóbulos
rojos por mm3.
Equipos
-Microscopio.
-Hemocitómetro (cámara de Neubauer).
Materiales y reactivos requeridos
Pipeta de glóbulos rojos (De Thoma) o pipeta automática
(de 0-100 mL).
Presenta cerca del extremo superior una marca de 101,
inmediatamente continúa una dilatación (bulbo) que contiene una perla roja
mezcladora, luego sigue el tallo (extremo más largo), el cual está dividido en
10 partes con 2 marcas: 1 acabando el bulbo y 0,5 a la mitad del tallo. Se
requiere igual que el recuento de leucocitos una boquilla para aspirar.
Diluyente de glóbulos rojos: Cloruro de Sodio al 0.9 %.
Diluyente de Hayem.
Contador manual.
Papel filtro.
Cuadrícula Cámara de Neubauer
Técnica:
1.-Mezclar la sangre obtenida con el anticoagulante o
tomar sangre capilar.
2.-Llenar la pipeta de glóbulos rojos con sangre hasta la
marca de 0,5 para realizar una dilución de 1/200, y si se carga hasta 1, la
dilución será 1/100. Limpiar la punta con gasa o papel absorbente.
3.-Introducir la pipeta en el tubo o frasquito conteniendo
diluyente (Hayem) y llenar de líquido de dilución hasta la marca de 101.
4.-Se coloca en un rotador automático o se hace rotar
manualmente de 2 a 3 minutos.
5.-Agitar bien la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del
tallo, luego colocar una gota pequeña cerca de un extremo de la cámara para que
por capilaridad se llene exactamente.
6.- Colocar en una cámara húmedo (Caja Petri) y dejar en
reposo por 3 minutos.
7.-Colocar en la platina del microscopio y enfocar la
cuadrícula a 10x, luego con el objetivo de 40x contar sobre el cuadrado grande
central de la cámara sólo en 5 cuadrados pequeños: uno central y cuatro
angulares (80 cuadraditos en total).
Resultados
Hematíes contados en 5 cuadrados pequeños se suman.
Nº de hematíes x mm3 = altura x dilución X área
Nº de hematíes x
mm3 = 1/10 x 1/200 x 1/5 = 1/10 000
Nº de hematíes x mm3 = hematíes contados x 10 000
Valores de referencia
(Unidades tradicionales millones de células/mm3).
Hombres 4 500 000 - 5 500 000
Mujeres 4 000 000 - 5 000 000
Niños (4 años) 4 200 000 - 5 200 000
Lactantes (1 -6 meses) 3 800 000 - 5 200 000
Recién nacidos 5 000 000 - 6 000 000
Resultados:
Conclusión:
Para preservar la constancia del medio
interno, las células hemáticas han de mantenerse constantes. Por eso las
células viejas o desgastadas son destruidas y renovadas continuamente. La
cantidad de cada tipo de células sanguíneas constituye un parámetro constante
para cada especie, con las variaciones normales debidas a la edad y al sexo.
Este parámetro sólo se verá alterado en determinadas circunstancias ambientales
o patológicas.
El recuento de células hemáticas, tanto de
eritrocitos como de leucocitos, es una de las pruebas clásicas en analítica
clínica. El recuento de plaquetas no se suele hacer, salvo cuando se sospecha
que el paciente tiene alguna anomalía grave (normalmente de tipo leucémico).
Estas pruebas tienen por objeto determinar la
concentración de los distintos tipos celulares presentes en la sangre. Permiten
detectar anomalías como anemias y policitemias en
el caso de los glóbulos rojos, y leucopenias y leucocitosis en
el de los glóbulos blancos.
La importancia clínica atribuida al recuento, sobre
todo en el caso de los eritrocitos, ha fluctuado a lo largo de la historia.
Actualmente se le da un valor menor, debido sobre todo a su inexactitud. Para
determinar la anemia se considera más exacto y simple el valor hematocrito
(relación entre el volumen de eritrocitos y el volumen total de sangre)
Como dato adicional
La cámara de recuento (de Neubauer o Burker)
consiste en una gruesa capa de vidrio con unas plataformas centrales que son
exactamente 0'1 mm más bajas que las laterales. En las plataformas centrales
existe una cuadrícula (diferente dependiendo de una u otra cámara, como muestra
la Fig.3).
Los lados de los cuadrados pequeños son, en ambas
cámaras, de 0'05 mm. Los lados de los cuadrados grandes en la cámara de
Neubauer son de 0'25 mm. La altura entre el cubreobjetos y la cámara central es
de 0'1 mm.
Normalmente se utiliza la cámara de Neubauer (los
cuadrados grandes para el recuento de leucocitos, y los pequeños para el de
hematíes).
Una vez realizado el recuento, los resultados deben
expresarse en número de células por milímetro cúbico de sangre.
nº céls./mm3 de sangre = (A/V) x f
Donde:
A = número de células contadas
V = volumen del cuadrado (en mm3)
f = factor de dilución
Cada persona debe realizar el recuento en al menos
3 cuadrados diferentes y hallar la media, antes de calcular la concentración de
células.
Bibliografía:
·
Hematologia
clínica de H.J. Woodliff/R.P. Herrmann el dia 19 de marzo de 2012
